產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

產(chǎn)品型號：

廠(chǎng)商性質(zhì)：經(jīng)銷(xiāo)商

訪(fǎng)問(wèn)量：373

更新時(shí)間：2025-04-09

本網(wǎng)站銷(xiāo)售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應用，不直接用于食品、藥品、臨床或動(dòng)物的診斷或治療！

產(chǎn)品名稱(chēng)：兔軟骨細胞

組織來(lái)源：軟骨組織

產(chǎn)品規格：5×105cells/T25細胞培養瓶

培養信息：

培養基 含FBS、生長(cháng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每3-4天換液一次

生長(cháng)特性 貼壁

細胞形態(tài) 梭形、多角形

傳代特性 可傳5代左右；3代以?xún)葼顟B(tài)優(yōu)良

消化液 0.25%

培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

細胞簡(jiǎn)介：

兔軟骨分離自關(guān)節軟骨組織；關(guān)節軟骨屬于透明軟骨，表面光滑、呈淡藍色、有光澤，它是由一種特殊的叫做致密結締組織的膠原纖維構成的基本框架，這種框架呈半環(huán)形，類(lèi)似拱形球門(mén)，其底端緊緊附著(zhù)在下面的骨質(zhì)上，上端朝向關(guān)節面，這種結構使關(guān)節軟骨緊緊與骨結合起來(lái)而不會(huì )掉下來(lái)，同時(shí)當受到壓力時(shí)候，還可以有少許的變形，起到緩沖壓力的作用。在這些纖維之間，散在分布著(zhù)軟骨細胞，軟骨細胞由淺層向深層逐漸由扁平樣至橢圓或圓形的細胞組成，這些軟骨細胞維持關(guān)節軟骨的正常代謝。關(guān)節軟骨沒(méi)有神經(jīng)支配，也沒(méi)有血管，其營(yíng)養成分必須從關(guān)節液中取得，而其代謝廢物也必須排至關(guān)節液中，關(guān)節軟骨的這種營(yíng)養代謝必須通過(guò)關(guān)節運動(dòng)，使關(guān)節軟骨不斷的受到壓力刺激才行，所以關(guān)節運動(dòng)對于維持關(guān)節軟骨的正常結構起重要的作用。關(guān)節軟骨細胞位于關(guān)節軟骨陷窩內。幼稚的關(guān)節軟骨細胞位于關(guān)節軟骨組織的表層，單個(gè)分布、體積較小、呈橢圓形，長(cháng)軸與關(guān)節軟骨表面平行，越向深層的關(guān)節軟骨細胞體積之間增大呈圓形，細胞核圓形或卵圓形、染色淺，細胞質(zhì)弱嗜堿性，常見(jiàn)數量不一的脂滴。成熟的關(guān)節軟骨細胞多2-8個(gè)成群分布于關(guān)節軟骨陷窩內，這些關(guān)節軟骨細胞由同一個(gè)母細胞分裂增殖而成，稱(chēng)為同源細胞群。電鏡下，關(guān)節軟骨細胞有突起和皺褶，細胞質(zhì)內有大量的粗面內質(zhì)網(wǎng)和發(fā)達的高爾基復合體及少量的線(xiàn)粒體。在組織切片中，關(guān)節軟骨細胞收縮為不規則形，在軟骨囊和細胞之間出現較大的腔隙。體外培養的關(guān)節軟骨細胞對于研究其生理功能、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義。

方法簡(jiǎn)介：

公司實(shí)驗室分離的兔關(guān)節軟骨采用膠原酶聯(lián)合消化制備而來(lái)，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測：

公司實(shí)驗室分離的兔關(guān)節軟骨經(jīng)Ⅱ型膠原蛋白免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養步驟：

一、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加4-6mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過(guò)夜（或將細胞懸液加入6cm皿中），培養過(guò)夜。第二天換液并檢查細胞密度。

二、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養。

a）、對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加5ml以上含10%血清的培養基終止消化。

3.輕輕吹打細胞，脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。

4. 按5-6ml/瓶補加培養液，將細胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養液的新皿中或者瓶中。

b）、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補加1-2ml培養液后吹勻，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或瓶中。

方法二：可選擇半數換液方式，棄半數培養基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養基新皿中或者瓶中。

收到細胞如何處理？

1、首先，觀(guān)察細胞培養瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象。若有，請拍照，并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續服務(wù)依據）。

2、用75%酒精擦拭細胞培養瓶表面，顯微鏡下觀(guān)察細胞狀態(tài)。因運輸問(wèn)題，部分貼壁細胞會(huì )有少量從瓶壁脫落；先不要打開(kāi)培養瓶蓋，將細胞置于細胞培養箱內靜置培養2-4小時(shí)，以便穩定細胞狀態(tài)。

3、仔細閱讀細胞說(shuō)明書(shū)，了解細胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細胞形態(tài)、所用基礎培養基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。

4、靜置完成后，取出細胞培養瓶，鏡檢、拍照，記錄細胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續服務(wù)依據）；建議細胞傳代培養后，定期拍照、記錄細胞生長(cháng)狀態(tài)。

5、貼壁細胞：若細胞生長(cháng)密度超過(guò)80%，可正常傳代；若未超過(guò)80%，移除細胞培養瓶?jì)扰囵B基，預留5ml左右繼續培養，直至細胞密度達80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。

6、懸浮細胞：將細胞培養瓶?jì)纫后w全部轉移至50ml無(wú)菌離心管內，1200rpm離心5min，離心后上清培養基可收集備用，管底細胞沉淀加入5ml培養基吹打、重懸。鏡檢時(shí)，若細胞密度超過(guò)80%，可將細胞懸液分至2個(gè)細胞培養瓶?jì)扰囵B，補加培養基至5ml；若細胞密度未超過(guò)80%，將細胞懸液移至原瓶繼續培養，直至細胞密度達80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作

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