產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

產(chǎn)品型號：

廠(chǎng)商性質(zhì)：經(jīng)銷(xiāo)商

訪(fǎng)問(wèn)量：390

更新時(shí)間：2025-04-09

本網(wǎng)站銷(xiāo)售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應用，不直接用于食品、藥品、臨床或動(dòng)物的診斷或治療！

產(chǎn)品名稱(chēng)：小鼠結腸成纖維細胞

組織來(lái)源：結腸

產(chǎn)品規格：5×105cells/T25細胞培養瓶

培養信息：

培養基：含FBS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長(cháng)特性：貼壁

細胞形態(tài)：成纖維細胞樣

傳代特性：可傳3代左右

消化液：0.25%

培養條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

小鼠結腸成纖維體外培養周期有限；建議使用配套的專(zhuān)用生長(cháng)培養基及正確的操作方法來(lái)培養，以此保證該細胞的優(yōu)良培養狀態(tài)。

細胞簡(jiǎn)介：

小鼠結腸成纖維分離自結腸組織；結腸在右髂窩內續于盲腸，在第3骶椎平面連接直腸。結腸分升結腸、橫結腸、降結腸和乙狀結腸4部分，大部分固定于腹后壁，結腸的排列酷似英文字母“M"，將小腸包圍在內。結腸橫切面由內到外依次為：黏膜（上皮層、固有層、黏膜肌層），黏膜下層（疏松結締組織），肌層（內環(huán)形、外縱行兩層平滑?。?，外膜（纖維膜或漿膜）。結腸成纖維細胞主要分布于外膜（纖維膜或漿膜）結締組織內。成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著(zhù)十分重要的作用。剛分離的結腸成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養基中。30min細胞貼壁，其中部分開(kāi)始伸出偽足，表現為小的突起；6h后細胞基本貼壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長(cháng)，不聚集成團；細胞生長(cháng)迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長(cháng)，平坦、胞體較大，細胞質(zhì)透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。

方法簡(jiǎn)介：

實(shí)驗室分離的小鼠結腸成纖維采用-膠原酶混合消化法結合差速貼壁法制備而來(lái)，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測：

實(shí)驗室分離的小鼠結腸成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養步驟：

一、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加4-6mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過(guò)夜（或將細胞懸液加入6cm皿中），培養過(guò)夜。第二天換液并檢查細胞密度。

二、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養。

a）、對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加5ml以上含10%血清的培養基終止消化。

3.輕輕吹打細胞，脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。

4. 按5-6ml/瓶補加培養液，將細胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養液的新皿中或者瓶中。

b）、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補加1-2ml培養液后吹勻，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或瓶中。

方法二：可選擇半數換液方式，棄半數培養基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養基新皿中或者瓶中。
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收到細胞如何處理？

1、首先，觀(guān)察細胞培養瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象。若有，請拍照，并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續服務(wù)依據）。

2、用75%酒精擦拭細胞培養瓶表面，顯微鏡下觀(guān)察細胞狀態(tài)。因運輸問(wèn)題，部分貼壁細胞會(huì )有少量從瓶壁脫落；先不要打開(kāi)培養瓶蓋，將細胞置于細胞培養箱內靜置培養2-4小時(shí)，以便穩定細胞狀態(tài)。

3、仔細閱讀細胞說(shuō)明書(shū)，了解細胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細胞形態(tài)、所用基礎培養基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。

4、靜置完成后，取出細胞培養瓶，鏡檢、拍照，記錄細胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續服務(wù)依據）；建議細胞傳代培養后，定期拍照、記錄細胞生長(cháng)狀態(tài)。

5、貼壁細胞：若細胞生長(cháng)密度超過(guò)80%，可正常傳代；若未超過(guò)80%，移除細胞培養瓶?jì)扰囵B基，預留5ml左右繼續培養，直至細胞密度達80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。

6、懸浮細胞：將細胞培養瓶?jì)纫后w全部轉移至50ml無(wú)菌離心管內，1200rpm離心5min，離心后上清培養基可收集備用，管底細胞沉淀加入5ml培養基吹打、重懸。鏡檢時(shí)，若細胞密度超過(guò)80%，可將細胞懸液分至2個(gè)細胞培養瓶?jì)扰囵B，補加培養基至5ml；若細胞密度未超過(guò)80%，將細胞懸液移至原瓶繼續培養，直至細胞密度達80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作