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更新時(shí)間:2025-04-09
小鼠角膜基質(zhì)細胞
商品屬性:
組織來(lái)源 | 產(chǎn)品規格 | 細胞形態(tài) | 貨號 |
眼角膜組織 | 5×105cells/T25細胞培養瓶 | 成纖維細胞樣 | YS-01X7477 |
細胞簡(jiǎn)介:
小鼠角膜基質(zhì)分離自眼角膜組織;角膜位于眼球前壁的一層透明膜,約占纖維膜的前1/6,從后面看角膜呈正圓形,從前面看為橫橢圓形。角膜厚度各部分不盡相同,中央部最薄。角膜有十分敏感的神經(jīng)末梢,如有外物接觸角膜,眼瞼便會(huì )不由自主地合上以保護眼睛。為了保持透明,角膜并沒(méi)有血管,透過(guò)外界空氣、淚液及房水獲取養份及氧氣。角膜分為五層,由前向后依次為:上皮細胞層、前彈力層、基質(zhì)層、后彈力層、內皮細胞層。角膜基質(zhì)層是角膜的主要組成部分,占據角膜厚度的90%,由角膜基質(zhì)細胞、膠原纖維和細胞外基質(zhì)構成。角膜基質(zhì)層缺損的修復主要由角膜基質(zhì)細胞的增殖及分泌細胞外基質(zhì)完成。角膜基質(zhì)層具有結構規整,透明度高的特點(diǎn),正常情況下角膜基質(zhì)細胞分泌組成基質(zhì)層的成分,維持角膜的透明度,此細胞對于角膜損傷的修復具有重要意義。角膜基質(zhì)細胞,存在于角膜基質(zhì)層中,在正常情況下,處于靜止狀態(tài)。但當角膜損傷時(shí),不同上皮來(lái)源的因子及環(huán)境信號,將影響角膜基質(zhì)細胞的應答反應,決定著(zhù)角膜能否被修復。
原代細胞的培養條件:
一、靜置貼壁細胞(包括半貼壁細胞的培養)培養
1、細胞要通過(guò)充分漂洗,以盡量除去消化液的毒性;
2、細胞接種時(shí)濃度要稍大一些,至少為5×108細胞/L;
3、培養基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養;
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5、應在37℃5% CO2的培養箱中培養;
6、在起始的2天中盡量減少振蕩,以防止剛貼壁的細胞發(fā)生脫落,漂??;
7、待細胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,應將原代細胞換液;
8、用骨髓或外周血中的懸浮細胞經(jīng)靜置培養1周時(shí),應將細胞懸液經(jīng)低速離心后換液。
二、懸浮細胞培養
1、原代培養時(shí)要盡量去除紅細胞;
2、短期培養,可在含10%小牛血清的RPMI1640培養基中進(jìn)行;
3、細胞濃度可在5-8×109/L范圍內,進(jìn)行分瓶試驗;
4、長(cháng)期培養時(shí),淋巴細胞中要加入生長(cháng)因子,白血病細胞中要加入少量的原患者血清,以利細胞生長(cháng);
5、細胞換液一般每隔3天需半量換液一次;
6、細胞傳代一般待細胞增殖加快、細胞密度較高時(shí)才能進(jìn)行。
方法簡(jiǎn)介:
公司實(shí)驗室分離的小鼠角膜基質(zhì)采用膠原酶消化后組織貼塊法制備而來(lái),細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測:
公司實(shí)驗室分離的小鼠角膜基質(zhì)經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養信息:
培養基 含FBS、生長(cháng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長(cháng)特性 貼壁
細胞形態(tài) 成纖維細胞樣
傳代特性 可傳3代左右
消化液 0.25%
培養條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
細胞傳代及凍存:
細胞傳代步驟 | 細胞凍存步驟 |
如果細胞密度達80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養。1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。 | 待細胞生長(cháng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細胞凍存。下面T25瓶為例; 1.細胞凍存時(shí),棄去培養基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,細胞變圓脫落后,加入2ml培養基終止消化,可使用血球計數板計數。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數量分配到凍存管中,注意凍存管做好標識。本公司按每個(gè)凍存管細胞數目大于1X106個(gè)細胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個(gè)小時(shí)以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
原代細胞的培養方法一般有以下4種:
① 組織塊培養法
組織塊培養是常用、簡(jiǎn)便易行和成功率較高的原代培養方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養瓶(或皿)中,瓶壁可預先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著(zhù)于瓶壁,使周邊細胞能沿瓶壁向外生長(cháng)。
?、?消化培養法
?、?懸浮細胞培養法
對于懸浮生長(cháng)的細胞,如白血病細胞、淋巴細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無(wú)需消化,可采用低速離心分離,直接培養,或經(jīng)淋巴細胞分層液分離后接種培養。
?、芷鞴倥囵B
器官培養是指從供體取得器官或組織塊后,不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養,器官培養可保持器官組織的相對完整性,可用于重點(diǎn)觀(guān)察細胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響,以及局部環(huán)境的生物調節作用。
公司正在出售的產(chǎn)品:
乙酸銨 (醋酸銨) 100g
AmmoniumAcetate 500g
化銨 100g
AmmoniumChloride 500g
鴨子胱天蛋白酶8(Casp-8)ELISA 試劑盒
Human ai brain tissue aibody (ABAb) ELISA Kit 人抗腦組織抗體(ABAb)試劑盒
HumanmajorhistocompatibilitycomplexⅢ,MHCⅢ/HLA-ⅢELISAKit 人主要組織相容性復合體Ⅲ類(lèi)(MHCⅢ/HLA-Ⅲ)試劑盒 進(jìn)口分裝
CLIAKitforAD(Humanamiodarone)ELISAKit人呋同
血液總乳酸比色法定量試劑盒20次
Mouseprostatespecificaigen,PSAELISAKit小鼠前列腺特異性抗原(PSA)試劑盒
APC標記人CD103 (ITGAE)單克隆抗體
組蛋白賴(lài)N-甲基轉移酶2C抗體
TNFRSF4重組人 TNFRSF4 / OX40 / CD134 蛋白 (His & Fc 標簽) Protein
鋅指同源框蛋白4(ZFHX4)重組蛋白 Recombinant Zinc Finger Homeobox Protein 4 (ZFHX4)
GFER重組人 GFER / ALR 蛋白 (His 標簽) Protein
CADM3 Protein Human 重組人 CADM3 / NECL1 / IGSF4B 蛋白 (His 標簽)
HA Protein H1N1 重組甲型流感 H1N1 (A/California/04/2009) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 標簽)
鋅指同源框蛋白4(ZFHX4)重組蛋白 Recombinant Zinc Finger Homeobox Protein 4 (ZFHX4)
CADM3 Protein Human 重組人 CADM3 / NECL1 / IGSF4B 蛋白 (His 標簽)
TNFRSF4重組人 TNFRSF4 / OX40 / CD134 蛋白 (His & Fc 標簽) Protein
HA Protein H1N1 重組甲型流感 H1N1 (A/California/04/2009) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 標簽)
GFER重組人 GFER / ALR 蛋白 (His 標簽) Protein
小鼠角膜基質(zhì)細胞大鼠高鐵血紅蛋白(MHB)試劑盒 ,英文名: MHB ELISA Kit
Rabbit Compleme 4 (C4) ELISA Kit 兔子補體蛋白4(C4)試劑盒
痢疾桿菌(SH)核酸試劑盒(PCR-熒光探針?lè )?span>) 48T
CLIAKitforMHCIII/AgBIII/H-1IIIELISAKit大鼠主要組織相容性復合體Ⅲ類(lèi)
體液內毒素凝膠法定量試劑盒20次
ELISAKitGHRP牛生長(cháng)激素釋放多肽