BY4741 感受態(tài)細胞操作方法（以下操作均按無(wú)菌條件的標準進(jìn)行）

1 取感受態(tài)細胞置于冰浴中，如需分裝可將剛融化細胞懸液分裝到無(wú)菌預冷的離心管中，置于冰浴中。
●  一次轉化感受態(tài)細胞的建議用量為50-100 μl，可以根據實(shí)際情況分裝使用。應注意所用DNA 體積不要超過(guò)感受態(tài)細胞懸液體積的十分之一。
以下實(shí)驗以100 μl感受態(tài)細胞為例。
2 向感受態(tài)細胞懸液中加入目的DNA（100 μl 的感受態(tài)細胞能夠被1 ng 超螺旋質(zhì)粒DNA 所飽和），輕輕旋轉離心管以混勻內容物，在冰浴中靜置30 分鐘。
3 將離心管置于42℃水浴中放置60-90 秒，然后快速將管轉移到冰浴中，使細胞冷卻2-3 分鐘，該過(guò)程不要搖動(dòng)離心管。
4 向每個(gè)離心管中加入900 μl 無(wú)菌的SOC 或LB 培養基（不含抗生素）， 混勻后置于37℃搖床振蕩培養1 小時(shí)（160-220 轉/分鐘），目的是使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標記基因表達，使菌體復蘇。
5 將離心管內容物混勻，吸取100 μl 已轉化的感受態(tài)細胞加到含相應抗生素的SOB 或LB 固體瓊脂培養基上，用無(wú)菌的彎頭玻棒輕輕的將細胞均勻涂開(kāi)。將平板置于室溫直至液體被吸收，倒置平板，37℃培養12-16 小時(shí)。
●  涂布用量可根據具體實(shí)驗來(lái)調整。如轉化的DNA 總量較多，可取更少量轉化產(chǎn)物涂布平板；反之，如轉化的DNA 總量較少，可取200-300 μl 轉化產(chǎn)物涂布平板。如果預計的克隆較少，可通過(guò)離心（4,000 rpm, 2分鐘）后吸除部分培養液，懸浮菌體后將其涂布于一個(gè)平板中。（涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉化菌落數過(guò)少可以將剩下的菌液再涂布新的培養板）