活化素Aelisa試劑盒檢測目的:用于測定血清,血漿及相關(guān)液體等樣本。例如適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細胞培養上清、組織勻漿等標本。
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被人心型脂肪酸結合蛋白(h-FABP)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經(jīng)過(guò)溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成*終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人心型脂肪酸結合蛋白(h-FABP)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長(cháng)下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度。
1、加樣
①除包被外都需45度加樣
②加樣體積要準確
③管底加樣,不能加在管壁上
④加樣時(shí)不能產(chǎn)生氣泡
2、溫浴
①加標本后和加結合物后,應立即放入按規定的反應溫度的水浴箱。
②各ELISA板不應疊在一起。
③為避免蒸發(fā),板上應加蓋,或將板平放在底部墊有濕紗布的金屬濕盒中。
④加入底物后,反應的時(shí)間和溫度通常不做嚴格要求。如室溫高于20℃,ELISA板可避光放在實(shí)驗臺上,以便不時(shí)觀(guān)察,待對照管顯色適當時(shí),即可終止酶反應。
3、洗滌
①洗滌在ELISA過(guò)程中不是反應步驟,但卻是決定實(shí)驗成敗的關(guān)鍵。
②目的是洗去反應液中沒(méi)有與固相抗原或抗體結合的物質(zhì)以及在反應過(guò)程中非特異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。
4、讀板
①陰性對照顏色極淺,在定性測定中一般可采用目視比色。
②如用酶標儀測定結果,準確性決定于ELISA板底的平整與透明度、酶標儀的質(zhì)量和軟件的算法。