人皰疹病毒 8 型 PCR 試劑盒說(shuō)明書(shū)

【產(chǎn)品名稱(chēng)】

商品名稱(chēng)：人皰疹病毒 8 型 PCR 試劑盒

Name ：Human Herpesvirus-8 (HHV-8) PCR Kit

【包裝規格】50 次/盒

【產(chǎn)品及特點(diǎn)】

人皰疹病毒 8 型(Human Herpesvirus-8,HHV-8)是從淋巴增生性疾

病和艾滋病患者淋巴細胞中培養獲得的一種新病毒，可通過(guò)唾液飛沫及密

切接觸（如接吻，共用餐、飲器具等）、輸血傳播。除免疫低

下（如先天性免疫缺陷、艾滋病、長(cháng)期服用免疫抑制劑等）外，絕大多數

人感染后終身都不會(huì )產(chǎn)生明顯癥狀；免疫低下者，如 HIV 感染者，當人

體特異性免疫被削弱至一定程度時(shí)， 潛伏的病毒可被激活并產(chǎn)生急性感

染癥狀，此時(shí)會(huì )出現間質(zhì)性肺炎、腦炎、腦膜炎、肝炎及多器官衰竭等癥

狀，活化的病毒可大規模感染 T 淋巴細胞，使免疫功能進(jìn)一步削弱，該

病毒對人體健康有較大影響，因此檢測人皰疹病毒 8型 DNA 具有重要意

義。本產(chǎn)品就是根據 PCR 原理開(kāi)發(fā)的、檢測此病毒的試劑盒。本產(chǎn)品具

有下列特點(diǎn)：

1.即開(kāi)即用，用戶(hù)只需要提供病毒 DNA 模板。

2.引物經(jīng)過(guò)精心優(yōu)化，專(zhuān)一性強，只擴增人皰疹病毒8 型病毒 DNA，與

其他病毒沒(méi)有交叉反應。

3.提供陽(yáng)性對照，便于區分假陰性樣品。

4.PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。

5.本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次，但只能用于科研。

【規格及成分】

成 份 編號 十孔盒包裝

PCR MagicMix 3.0 63981 1 mL（紅蓋）

超純水 109350 1 mL（亮黃色）

人皰疹病毒 8型 PCR 引物混合液 3026yw 100 μL（白蓋）

人皰疹病毒 8 型 PCR 陽(yáng)性對照

（1×10E8 拷貝/μL）

93981-3026pc 50 μL（黃蓋）

【運輸及保存】

低溫運輸，-20℃保存，保存期限為一年。人皰疹病毒 8 型 PCR 陽(yáng)性對

照需要單獨放置，不要污染其他試劑。

【自備試劑】

樣品 DNA。

【使用方法】

一、樣品 DNA 的制備

用自選方法純化 N+2 個(gè)樣品的 DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數病毒 DNA

提取試劑盒兼容。

2.如果有 N 個(gè)樣品，則需做 N+2 個(gè)提取，包括一個(gè)樣品制備陽(yáng)性對照和

一個(gè)樣品制備陰性對照。樣品制備陽(yáng)性對照是人皰疹病毒8 型 PCR 陽(yáng)性

對照的 1000 倍稀釋液，其總體積等于試劑盒所需的樣品量，樣品制備陰

性對照是直接用水。

二、設置 PCR 反應（40μL 體系）

3.對 N+2 個(gè)樣品，在 PCR 時(shí)需要增加一個(gè) PCR 陽(yáng)性對照和一個(gè) PCR 陰

性對照，故需要設置 N+4 個(gè)反應。在 N+4 個(gè) PCR 管中分別加入下列成

分：

成分

N+2 個(gè)

樣品管

PCR 陰性

對照

PCR 陽(yáng)性

對照

PCR Magic Mix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL

人皰疹病毒 8 型通用 PCR 引物混

合液

各 2 μL 2 μL 2 μL

N+2 個(gè)樣品 DNA 模板 各 18 μL - -

PCR 陰性對照（水） - 18 μL -

PCR 陽(yáng)性對照（人皰疹病毒 6 型通

用 PCR 陽(yáng)性對照的 1000 倍稀釋

液）

- - 18 μL

4.按下表設置 PCR 反應: 過(guò)程 溫度 時(shí)間

預變性 95℃ 5 min

PCR 反應

（35 個(gè)循環(huán)）

95℃ 15 sec

55℃ 15 sec

82℃ 30 sec 最后延伸 82℃ 10 min 三、電泳檢測

5.取 5μL PCR 產(chǎn)物電泳進(jìn)行檢測。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在擴增結束

后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。預期的 PCR 產(chǎn)物長(cháng)

度為 481bp。陽(yáng)性對照必須有此條帶出現，陰性對照必須無(wú)任何擴增，否

則實(shí)驗無(wú)效。對沒(méi)有擴增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復 PCR 擴增

以排除 PCR 抑制劑的感染。