短波單胞菌說(shuō)明書(shū)

菌種的培養：

、菌種是指食用菌菌絲體及其生長(cháng)基質(zhì)組成的繁殖材料。菌種分為母種（一級種）、原種（二級種）和栽培種（三級種）三級。工業(yè)發(fā)酵的有用菌種，其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復篩。

2、挑選具有某種能力的有用菌種，也稱(chēng)種子制備，是指菌種在一定條件下，經(jīng)過(guò)擴大培養成為具有一定數量和質(zhì)量的純菌種的制備過(guò)程。以作接入發(fā)酵罐中進(jìn)一步擴大菌體量及合成產(chǎn)物之用。

3、種子制備包括孢子制備和菌絲體制備（見(jiàn)圖） 菌種制備 ，其中()～(4)為孢子制備過(guò)程。

4、保存在沙土管或冷凍管中的菌種，用無(wú)菌手續挑取少許，接入瓊脂斜面培養基上，在25℃（或較高溫度）下培養5～7天（或較長(cháng)時(shí)間。所得孢子還需進(jìn)一步用較大表面積的固體培養基以獲得更多孢子（對于霉菌類(lèi)孢子制備，多數采用大米、小米之類(lèi)的天然培養基）。

5、將培養成熟的斜面孢子制成懸浮液，接種到扁瓶固體培養基上，于25～28℃培養4天。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至0%以下，并放入 4℃冰箱中備用。一次制得的孢子瓶可在上延續使用半年左右。

放線(xiàn)菌孢子的培養基大多是采用麩皮或豌豆浸出液及無(wú)機鹽與瓊脂制成的。將斜面孢子接入擴大的扁瓶孢子培養基中,于28～37℃培養5～4天。所獲得的大量孢子可直接作為種子罐(6)的種子。

6、如果有些菌種不產(chǎn)孢子，如赤霉素產(chǎn)生菌或產(chǎn)孢子不多的，則可采用搖瓶(5)液體培養制得菌絲體，作種子罐的種子。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發(fā)芽、生長(cháng)、繁殖成大量菌體。其中的培養基組分應是易于被菌體利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米漿），及無(wú)機鹽(如磷酸鹽)等。作為發(fā)酵罐(7)的種子應生命力旺盛、染色深、菌絲粗壯，無(wú)雜菌及異常菌體。接種量一般在0%～20%。

低溫存法：

①簡(jiǎn)單保存法，將瓊脂斜面孢子培養物、菌絲懸浮液以及由麩皮、大米、小米等谷物原料制成的孢子培養物置于4℃冰箱保存,保存時(shí)間不超過(guò)～2個(gè)月，若將谷物原料制備的孢子瓶抽真空并在棉塞上浸蠟,以隔絕外界空氣和水汽,保持時(shí)間可達3～4個(gè)月；②液氮超低溫保存法，將生長(cháng)穩定期的細胞懸浮在0%甘油或其他低冰點(diǎn)液體中，密封于安瓿管內，然后控制冷卻速度，使安瓿管溫度逐步下降至 -35℃時(shí)，即可置于-50～-96℃的液氮罐中保存。大多數微生物如病毒、噬菌體、多種細菌、放線(xiàn)菌、酵母和原蟲(chóng)、特別是一些用冷凍干燥法有困難的微生物，都可用此法長(cháng)期保存。

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短波單胞菌 培養溫度：  35-37℃ 英文名稱(chēng)：Short wave single cell 培養保藏法:培養后于4—6℃冰箱內保存。

脫水存法：

①沙土保存法，能產(chǎn)孢子的細菌、放線(xiàn)菌及霉菌可采用此法保存,即將沙和土以3:2比例混合，經(jīng)稀酸處理洗凈過(guò)篩,裝入小試管內,裝置高度為cm;滅菌2～3次，烘干后即可將在斜面培養基上生長(cháng)良好的孢子，用無(wú)菌蒸餾水2～2.5ml制成孢子懸液，吸取少許加入沙土管中，經(jīng)真空抽干，外觀(guān)呈松散狀態(tài),于4℃冰箱保存，保存期可達5～7年。

② 冷凍干燥法,將孢子懸浮液與保護劑（一般用脫脂牛奶或血清）相混合，放在安瓿管內于-20～-30℃的乙醇浴中速凍。然后，在低溫下用真空泵抽干，并用五氧化二磷或干冰使水汽結凍，熔封安瓿管，于低溫下保存。保存期可達5～0年之久。

③ 石蠟油封存法，在斜面菌種培養物上,倒上滅菌后的石蠟油，高出斜面cm，于4℃冰箱或低溫干燥處保存，此法不適用于能利用石蠟油作碳源的微生物，保存期為一年以上。