人ACE2檢測試劑盒(ELISA方法)說(shuō)明書(shū)

實(shí)驗原理
是采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被兔α2巨球蛋白(A2M)捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過(guò)溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的兔α2巨球蛋白(A2M)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長(cháng)下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。 
樣本處理要求
1.血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過(guò)程中如出現沉淀，應再次離心。 
2.血漿：應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應該再次離心。
3.尿液：用無(wú)菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。
4.細胞培養上清：檢測分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。
5.組織標本：切割標本后，稱(chēng)取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
6.標本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻進(jìn)行，提取后應盡快進(jìn)行實(shí)驗。若不能人上進(jìn)行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融.
7.不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。
品優(yōu)勢
1.  品種齊全、質(zhì)量可靠、靈敏度高、操作簡(jiǎn)便、穩定性好。
2. 特異性強：不與其它可溶性結構類(lèi)似物交叉反應。
3. 重復性好：板內變異系數小于10% ，板間變異系數小于15% 。
4. 同城（上海）需要代測可免費上門(mén)取樣，享送貨上門(mén)服務(wù)。
5. 根據客戶(hù)需求專(zhuān)業(yè)定制elisa試劑盒并提供免費代測服務(wù)。
6. 臻科生物可提供專(zhuān)業(yè)技術(shù)服務(wù),全方為您解決實(shí)驗進(jìn)程中所遇到一切實(shí)驗問(wèn)題。
四、ELISA試劑盒組成
名稱(chēng)
96孔配置
48孔配置
備注
微孔酶標板
8孔×12條
8孔×6條
無(wú)
標準品
0.3mL*6管
0.3mL*6管
無(wú)
樣本稀釋液
6mL
3mL
無(wú)
檢測抗體-HRP
10mL
5mL
無(wú)
20×洗滌緩沖液
25mL
15mL
按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀釋
底物A
6mL
3mL
無(wú)
底物B
6mL
3mL
無(wú)
終止液
6mL
3mL
無(wú)
封板膜
2張
2張
無(wú)
說(shuō)明書(shū)
1份
1份
無(wú)
自封袋
1個(gè)
1個(gè)
無(wú)
注意事項
1. 嚴格按照規定的時(shí)間和溫度進(jìn)行溫育以保證準確結果。所有試劑都必須在使用前達到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。
2. 洗板不正確可以導致不準確的結果。在加入底物前確保盡量吸干孔內液體。溫育過(guò)程中不要讓微孔干燥掉。
3. 消除板底殘留的液體和手指印，否則影響OD值。
4. 底物顯色液應呈無(wú)色或很淺的顏色，已經(jīng)變藍的底物液不能使用。
5. 避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結果。
6. 在儲存和溫育時(shí)避免強光直接照射。
7. 平衡至室溫后再打開(kāi)密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。
8. 任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強烈氣體。任何漂白成分都會(huì )破壞試劑盒中反應試劑的生物活性。
9. 不能使用過(guò)期產(chǎn)品。
10. 實(shí)驗還需要酶標儀（450nm），37℃恒溫箱，高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL以及蒸餾水或去離子水。
11. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡后方可使用。
12. 20×洗滌緩沖液的稀釋?zhuān)赫麴s水按1：20稀釋?zhuān)?份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。
13. 如果可能傳播疾病，所有的樣品都應管理好，按照規定的程序處理樣品和檢測裝置。
操作步驟
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；
3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。
4.除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿(mǎn)洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長(cháng)處測定各孔的OD值。
實(shí)驗結果計算 
以所測標準品的OD值為橫坐標，標準品的濃度值為縱坐標，在坐標紙上或用相關(guān)軟件繪制標準曲線(xiàn)，并得到直線(xiàn)回歸方程，將樣品的OD值代入方程，計算出樣品的濃度。
八、關(guān)于兔α2巨球蛋白(A2M)定量ELISA試劑盒的特別說(shuō)明
公司長(cháng)期專(zhuān)業(yè)供應各類(lèi)科研產(chǎn)品，包括ELISA試劑盒、農殘試劑盒、放免試劑盒、生物試劑、檢測卡等優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。