ELISA(酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗)是一種常用于檢測蛋白質(zhì)濃度的技術(shù)。通過(guò)特異性抗體結合目標分子,可以定量檢測樣品中的IFN-γ濃度。
γ干擾素(IFN-γ)是免疫系統中重要的調節因子,可促進(jìn)細胞介導的免疫應答。在許多疾病和感染中,IFN-γ濃度的變化與疾病發(fā)展密切相關(guān)。因此,檢測IFN-γ的水平對于診斷疾病、監測疾病進(jìn)展以及評估藥物療效具有重要意義。
γ干擾素ELISA試劑盒是一種專(zhuān)門(mén)用于檢測IFN-γ的ELISA試劑盒。該試劑盒包含預涂有特異性抗IFN-γ的微孔板、標準品、檢測抗體、顯色底物和停止液等組成部分。在使用前,需要將試劑盒和樣品升溫至室溫,并按照說(shuō)明書(shū)操作。
盡管γ干擾素elisa試劑盒的操作過(guò)程看似簡(jiǎn)單,但沒(méi)做到位的話(huà)就會(huì )影響試驗的作用。所以γ干擾素elisa試劑盒在試驗過(guò)程中這幾點(diǎn)非常重要:
1、重要的洗刷:
不充分的洗刷會(huì )導致差異和高布景,從而帶來(lái)不抱負的試驗結果。假如未結合的材料殘留在微孔板中,那么它會(huì )添加布景噪音。有必要的話(huà),可添加洗刷液中的鹽濃度,這會(huì )阻止非特異結合反響。假如布景過(guò)高,置疑洗刷不行時(shí),能夠測驗添加洗刷次數。
2、關(guān)鍵的關(guān)閉:
關(guān)閉液的作用是讓不相關(guān)的蛋白占據微孔板中潛在的結合位點(diǎn)。這就降低了可產(chǎn)生信號的抗體非特異結合的時(shí)機。假如布景過(guò)高,置疑關(guān)閉不充分,那么能夠測驗運用更高濃度的關(guān)閉液,或適當延伸關(guān)閉時(shí)間。
現在主要有兩種類(lèi)型的關(guān)閉液:蛋白和非離子型去污劑。ELISA試劑盒運用的類(lèi)型須取決于多個(gè)因素,包括微孔板的表面試劑、吸附的抗原、抗體和檢測試劑。好的關(guān)閉液應降低非特異性結合,但它不應當與抗原、抗體或檢測試劑發(fā)生相互作用。
3、抗體濃度須優(yōu)化:
假如試劑稍有不同,則或許需求優(yōu)化抗體的量。非特異的抗體結合會(huì )添加布景。為了防止這一點(diǎn),切勿運用過(guò)多的一抗或二抗。
4、檢測試劑要適量:
切勿運用過(guò)多的檢測試劑。假如濃度過(guò)高,ELISA試劑盒或許未正確稀釋?zhuān)瑒t會(huì )導致高布景。也不要顯色過(guò)度,如有必要,優(yōu)化一下何時(shí)應加入終止液。
只要確保每一步操作都做到位,才會(huì )出現的試驗結果。所以ELISA試驗的每一步都很重要,不能夠漫不經(jīng)心。